Диагностикумы, сконструированные на основе непрямых схем ИФА

Диагностикумы, сконструированные на основе непрямых схем ИФА
Биохимия
курсовая
30
2018
RUB 1575
1575р.

Нажмите, чтобы зарегистрироваться. Работа будет добавлена в личный кабинет.

Введение…………………………………………………………………….2
1. Диагностикумы и их разновидности…………………………………...4
1.1 Диагностические препараты. Антигенные препараты (диагностикумы, эритроцитарные диагностикумы, антигены)………………..4
1.2 Диагностические сыворотки. Получение и применение. Способ получения адсорбированных агглютинирующих сывороток по Кастеллани………………………………………………………………………...5
2. Методы иммуноанализа с применением ферментной метки…………8
2.1 Иммуноферментный анализ (ИФА)…………………………………..8
2.2 Гетерогенные методы иммуноферментного анализа……………….10
3. Неконкуретный метод ИФА…………………………………………...14
3.1 Метод «сэндвича» как вариант постановки ИФА…………………..15
3.2 Элиспот (ELIspot), ЭС………………………………………………...16
3.3 Иммуноблот ИБ (вестернблот)………………………………………18
3.4 Иммуногистохимия, иммуноцитохимия (ИГХ)…………………….20
4. Конкурентный метод ИФА…………………………………………….21
4.1 Гомогенные методы иммуноферментного анализа………………...22
5. Общие условия проведения метода ИФА…………………………….23
6. Пример методики косвенного неконкурентного метода ИФА……24
Заключение………………………………………………………………..27
Список использованной литературы…………………………………….29
На сегодняшний день большое значение имеют специфические методы диагностирования в лабораторных условиях различных патологий, имеющих инфекционную и неинфекционную этиологию. Уже несколько десятилетий как появляются новые методики, позволяющие идентифицировать микроорганизмы, кроме того серологические и иммунохимические методы приобрели новые вариации, причем используется широкий спектр биопрепаратов для диагностики. Посему каждый специалист должен получить комплексные систематизированные знания в сфере иммунобиологических препаратов, имеющих диагностическую направленность.
В современной диагностической практике используется широкий спектр биопрепаратов, их применяют в иммунологической реакции, лежащей в основе. Классические диагностические лабораторные методы подразумевают использование иммунных сывороток и иммуноглобулинов, диагностикумов и антигенов, бактериофагов. Наиболее перспективное направление считается то, которое занимается получением таких веществ как - высокоактивные и специфичные иммунореагенты моноклонального антитела (МКА) и абзимы. Создавая усовершенствованные диагностические тест - системы, применяемые в современной серологической реакции необходимо использование подобных биопрепаратов.[5]
Современная лабораторная диагностика имеет в своем арсенале ряд инновационных подходов к идентификации инфекционного заболевания, такие как сконструированные мультиплексные тесты по типу иммуночипа. Подобные методы имеют высокую производительность обеспеченную применением специфичного иммунореагента. Диагностические препараты и их сортимент достаточно часто меняется поскольку появляются новые и возвращаются «старые» инфекции, кроме того стоит учитывать тот факт, ч то в не эндемичных регионах могут появиться неожиданные инфекции, посредством завоза. Следует сказать, что применение таких биологических препаратов, как иммунная сыворотка и МКА (в том числе иммуноадгезины) достаточно распространено при иммунодиагностике таких патологий, как аллергия и аутоиммунные болезни, эндокринные нарушения, ревматоидные процессы.
Следовательно, сложившиеся современные условия сулят нам необходимость в разработке эффективного средства применяемого при специфической лабораторной диагностике, а так же это перспективное направление прикладной иммунологии.

Специальные диагностические препараты применяются для идентификации вирусных, бактериальных и грибных клеток, кроме того диагностируются инфекционные и неинфекционные заболевания. Посредством таких препаратов возможно достоверное выявление аллергических и иммунопатологических расстройств, также определение иммунного статуса и иммунологической тканевой совместимости.
Диагностикум состоит из взвеси убитых бактериальных организмов или же антигенных клеток, применяемые в серологической реакции, либо для определения наличия антител в сыворотке крови. Диагностикум может включать в себя большое разнообразие иммунореагентов, таковыми являются иммуномодулятор, антитело, антиген, аллерген, все зависит от целей проводимого исследования. Идентификация микрофлоры проводится также посредством диагностических иммунных сывороток, на которые у диагностируемого должна быть та или иная реакция.[1, c. 10]
Для диагностики, чтобы обнаружить антитела в кровяной сыворотке больного, реконвалесценты и бактерионосители актуально использование серологических реакций.
При постановке подобной реакции используют диагностикум – препарат состоящий из взвеси обезвреженной культуральной жидкости, либо определенных антигенов.
Используют диагностикумы в серологической реакции не спроста, они имеют ряд преимуществ, нежели живые микробные культуры (работать с ними безопасно), кроме того изготавливая диагностикумы необходимо использовать такой штамм микроорганизмов, который имеет высокую резистентность к антителам, более того должен продолжительно хранить свойства антигенов.
В процессе приготовления диагностикума необходимо инактивировать микроорганизмы посредством различных химических веществ, в частности формалина, как один из лучших консервантов. Микроорганизмы, которых убили при нагревании используют реже, поскольку их антигенность очень низка.
1. Антитела. Методы. В 2-х кн. Кн. 2 / пер. с англ. ; под ред. Д. Кэтти. М.: Мир, 1991.-384 с.
2. Вакула В.А. Биотехнология: что это такое? М.: Молодая гвардия, 2012. - 302с.
3. Джесси Р. Биотехнология. М.: Медис.- 102с.
4. Иммуноферментный анализ / пер. с англ. ; под ред. Т. Нго, Г. Ленхоффа. М.: Мир, 1988.- 446 с.
5. Иммуноферментные тест–системы для диагностики энтеровирусных инфекций человека на основе использования рекомбинантных технологий / К. Л. Дедюля, О. Н. Казинец, Т. В. Амвросьева и др. // Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение. – 2013. – № 4 (48). – С. 24–28.
6. Клиническая иммунология: учебное пособие\под ред. А.М, Земскова.-М.: 2006.-320с.
7. Клунова С.М., Егорова Т.А. Биотехнология. М.:Академия, 2010.- 256с.
8. Ковальчук Л.В. Иммунология. М.: ГэЭОТАР – Медиа, 2010.- 176с.
9. Кувшинов, М. В. Актуальные проблемы сравнения результатов количественных иммуноферментных тестов / М. В. Кувшинов, А. П. Обрядина // Клин. лабораторная диагностика. – 2012. – № 4. – С. 32–35.
10. Манолов, А. Твердофазные радиоиммунные методы для количественного экспресс-анализа в микробиологии / А. Манолов // ЖМЭИ. 1985. № 4. С. 100–107.
11. Научно–методические разработки биотехнологий производства иммунобиологических препаратов для экспресс–диагностики инфекционных заболеваний и детекции их возбудителей / И. С. Тюменцева, И. В. Жарникова, Е. Н. Афанасьев и др. // Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение. – 2015. – № 4 (56). – С. 21–25.
12. Новые методы иммуноанализа / М. Тертон [и др.] ; пер с англ. М.: Мир, 1991.- 280 с.
13. Орехов С.Н. Фармацевтическая биотехнология. М.: ГЭОТАР – Медиа.- 2013. - 384с.
14. Самойлович М.П. Совершенствование гибридомной технологии и создание моноклональных антител для систем иммуноанализа. СПб.: 2006, - 238с.
15. Свешников П.Г. Введение в молекулярную иммунологию и гибридомную технологию. М.: Изд – во МГУ, 2006.
16. Теория и практика иммуноферментного анализа / А. М. Егоров [и др.]. М.: Высш. шк, 1991.- 288 с.
17. Хаитов Р.М. Иммунология: учебник.-М.:2006.-320с.
18. Шмид Р. Наглядная биотехнология и генетическая инженерия. М.: АСТ, 2014.- 328с.